聚焦QIAGEN轉(zhuǎn)染試劑

小分子RNA轉(zhuǎn)染

小分子RNA研究一直熱度不減，之前是siRNA，現(xiàn)在是miRNA。于是QIAGEN陸續(xù)推出了多個小RNA轉(zhuǎn)染產(chǎn)品，包括高通量轉(zhuǎn)染試劑，以及siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的預(yù)混液，讓大家省時省力，早發(fā)文章。

HiPerFect

HiPerFect是QIAGEN較早推出的小RNA專用轉(zhuǎn)染試劑：這種非脂質(zhì)體的脂質(zhì)分子可以在 siRNA低至100 pM濃度的條件下轉(zhuǎn)染(推薦濃度是1 nM-5 nM)，保持高效基因沉默的同時降低脫靶效應(yīng)，正是這一產(chǎn)品的精髓所在。除了siRNA，HiPerFect還能夠用于miRNA模擬物和抑制劑的轉(zhuǎn)染，滿足miRNA功能分析的需要。

HiPerfect可高效轉(zhuǎn)染多種細胞類型，包括HeLa、HeLa S3、HEK 293、NIH/3T3、Huh-7、HepG2、MCF-7、HUVEC和NHLF等。對于原代細胞，產(chǎn)品手冊中列出了轉(zhuǎn)染原代HUVEC、成纖維細胞、角質(zhì)細胞、上皮細胞和平滑肌細胞的操作步驟，相當貼心。

HiperFect轉(zhuǎn)染試劑的方便程度也是****的——你甚至可以在**內(nèi)完成整個接種到檢測結(jié)果的轉(zhuǎn)染實驗，這對于高通量反應(yīng)簡直是求之不得的福音：轉(zhuǎn)染前將細胞按比例接種到24孔培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)基可以是含有***和血清的，在37度培養(yǎng)箱中保溫。用無血清培養(yǎng)基稀釋siRNA，加入HiperFect轉(zhuǎn)染試劑混勻并溫育5-10min，將混合物逐滴加入培養(yǎng)皿中混勻，培養(yǎng)細胞直到適當?shù)臅r候檢測基因沉默效果。**之內(nèi)可以完成再次接種、轉(zhuǎn)染到檢測結(jié)果!這個快速操作流程簡便到還可以用于“反向轉(zhuǎn)染”，方便至極。

就價格而言，QIAGEN也是越來越平易近人了。在2005年的專題中，HiPerFect 0.5 ml的價格是2800元，而如今的目錄價竟然只要1760元。在這個物價飛漲的年代，啥東西都是噌噌的往上漲，俺就沒見過降價的東西，HiPerFect 真是讓人內(nèi)牛滿面啊。QIAGEN還提供0.1 ml的小包裝(詢價)和1 ml包裝(3120元)，當然，還有4×1 ml和100 ml的更大包裝，選擇多多。

HiPerFect HTS

QIAGEN還帶來了HiPerFect轉(zhuǎn)染試劑的高通量版本 – HiPerFect HTS Reagent，能夠高通量地轉(zhuǎn)染siRNA/miRNA，適合通路分析、**開發(fā)及miRNA功能研究。對于高通量實驗而言，操作簡便、結(jié)果可靠和經(jīng)濟實惠都很關(guān)鍵。HiPerFect HTS試劑能同時滿足這幾點。

HiPerFect HTS試劑提供了穩(wěn)定可靠的轉(zhuǎn)染，確保了高通量實驗的一致性和可重復(fù)性。它的操作步驟也有所不同，目的是盡量減少耗材的使用，減少移液步驟，在節(jié)約資源和時間的同時也有利于標準化。

說明書中提供了在96孔板和384孔板中反式轉(zhuǎn)染貼壁細胞的操作步驟。在操作過程中，細胞可在同**接種和轉(zhuǎn)染。具體過程是，siRNA先加入孔中，再加入HiPerFect HTS試劑，在復(fù)合物形成之后，將細胞加入孔中。

除了塑料耗材的節(jié)省之外，每次轉(zhuǎn)染只使用少量的轉(zhuǎn)染試劑，確保大的經(jīng)濟效益，同時也不會折損結(jié)果的可靠性。HiPerFect HTS試劑本身也有一些優(yōu)勢，比如批次間一致性高，且稀釋后的穩(wěn)定性高。這些性質(zhì)對于實際操作也蠻重要，例如，你可以在早上稀釋，然后用一整天，轉(zhuǎn)染效果也不會打折。

HiPerFect HTS試劑目前有三種規(guī)格。迷你版(0.1 ml)的試劑適合初實驗，價格為590元，可用于4-10塊 96孔板。而2×1 ml和6×1 ml的試劑分別為10120元和26560元。當然，如果真的用量很大，那應(yīng)該會有一個不錯的折扣。

FlexiTube siRNA Premix

FlexiTube siRNA Premix 是典型的省時省力型試劑，它以單管形式提供了您感興趣基因的siRNA以及高效的轉(zhuǎn)染試劑，無需混合，即可直接用于細胞轉(zhuǎn)染。而傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染實驗需要先稀釋 siRNA，再與轉(zhuǎn)染試劑混合并孵育。相比之下，此預(yù)混液可節(jié)約大量的時間和勞力。同時，F(xiàn)lexiTube siRNA Premix的使用也減少了實驗內(nèi)和實驗間的差異，保證了不同實驗間的高度一致性。

此外，F(xiàn)lexiTube siRNA Premix也不僅僅是簡單的混合，其中試劑與siRNA的比率已預(yù)先優(yōu)化過，確保高的轉(zhuǎn)染效率和基因沉默。你無需優(yōu)化siRNA與試劑的比例，可快速啟動RNAi 實驗，避免了冗長的實驗優(yōu)化過程。目前QIAGEN提供了針對人類和小鼠基因的FlexiTube siRNA Premix。

FlexiTube siRNA Premix中包含的FlexiTube siRNA是利用HP OnGuard siRNA Design 設(shè)計的，確保其具備高特異性。siRNA的設(shè)計基于人工智能設(shè)計程序，并結(jié)合大量的RNAi實驗數(shù)據(jù)。同時使用新的序列數(shù)據(jù)庫及**的同源性分析軟件對 siRNA 的設(shè)計進行檢測。

大家肯定關(guān)心轉(zhuǎn)染效率如何，當然這也是因細胞而異的。至于難搞的原代細胞和懸浮細胞，你可以嘗試一下加大用量。反之，如果你還想降低siRNA的終濃度，當然也可以，只需要使用更少量的FlexiTube siRNA Premix。例如，使用建議量的一半，這樣siRNA的終濃度即為12.5 nM。取決于不同的細胞類型，有時siRNA終濃度低至1 nM也能產(chǎn)生高效的基因沉默。

DNA的轉(zhuǎn)染

Attractene

Attractene轉(zhuǎn)染試劑是一種非脂質(zhì)體的脂質(zhì)分子，它能夠高效轉(zhuǎn)染各種貼壁細胞，包括難轉(zhuǎn)染的細胞如 HaCaT、MonoMac6和HCT116，也可以用于懸浮細胞(Jurkat、K562)。經(jīng)過全球多個國家的客戶試用，大部分反映轉(zhuǎn)染效果類似或優(yōu)于他們目前正在使用的轉(zhuǎn)染試劑，而且普遍反映其毒性更小。一個成功的轉(zhuǎn)染實驗的關(guān)鍵因素是看轉(zhuǎn)染試劑沒有細胞毒性。如果對細胞的毒性太大，基因表達的模式可能改變，結(jié)果會變得不可靠。如果你現(xiàn)在正面臨轉(zhuǎn)染效率不高或毒性太大，不妨試一下Attractene。而且它的轉(zhuǎn)染步驟經(jīng)過改進，是一種“快進”模式，接種和轉(zhuǎn)染可以在當天進行，更節(jié)省時間。

Attractene轉(zhuǎn)染試劑適合于瞬時轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，以及DNA和siRNA或miRNA mimics 或inhibitors的共轉(zhuǎn)染。它的規(guī)格有三種：0.1ml、1ml和4×1ml，每次用量約為1.5ul(24孔板)。1 ml的價格為3250元。

至于PolyFect、Effectene、SuperFect和TransMessenger，之前的專題已經(jīng)詳細介紹過，請大家看這里(http://www.ebiotrade.com/newsf/2005-8/200589173645.htm)，只是里面的價格不再適用。大家可以登陸QIAGEN網(wǎng)站查詢現(xiàn)在的價格。

Qiagen還推出了轉(zhuǎn)染步驟數(shù)據(jù)庫。你可以通過這個數(shù)據(jù)庫找到適合你的細胞系和培養(yǎng)板/皿大小的轉(zhuǎn)染試劑和專門步驟。點擊http://www.qiagen.com/transfectionprotocols/default.aspx，選擇細胞系、核酸類型(DNA、mRNA、miRNA或siRNA)、培養(yǎng)形式(6孔板或其他)，就會彈出Qiagen推薦的轉(zhuǎn)染試劑，和專門的轉(zhuǎn)染步驟，你可以下載或打印，非常方便。這樣可省事多了，能節(jié)約不少優(yōu)化的時間，還能節(jié)約樣品和試劑。