說到轉(zhuǎn)染，怎么能忘了Invitrogen，也就是現(xiàn)在的Life Technologies呢?自1993年Lipofectamine? 試劑上市以來，它一直是市場上賣得火的轉(zhuǎn)染試劑。直到后來Lipofectamine 2000、RNAiMAX、LTX上市，Lipo旋風越刮越猛。至于小分子RNA的轉(zhuǎn)染，有Lipofectamine 2000和RNAiMAX兩員猛將頂著，似乎可以高枕無憂，但Invitrogen還在開發(fā)更多的轉(zhuǎn)染試劑和儀器，試圖覆蓋更廣的市場。
有些百毒不侵的細胞，你還真拿它沒辦法，轉(zhuǎn)染試劑就是不管用。這時，我們得換一招。你有兩個選擇：電穿孔和病毒。體驗過的人都知道，用病毒作為載體來轉(zhuǎn)染相當復雜。通常需要構(gòu)建重組子，讓它表達前體miRNA或shRNA，然后收集病毒粒子，轉(zhuǎn)導細胞，在那里生成有功能的sirna或miRNA模擬物。如果順利的話，大概需要幾個星期。
電穿孔這種方法就相對簡單一些，但你需要投入一臺儀器。過去的說法是，這種方法毒性較大，誘導細胞膜上形成孔的電脈沖會殺死一定比例的細胞，因此，每次實驗都需要一定量的細胞。
為了克服這些問題，invitrogen 2009年推出了Neon系統(tǒng)。與傳統(tǒng)的電穿孔儀器相比，它的獨特之處在于用一個特別的移液器吸頭取代了傳統(tǒng)的電擊杯。這樣流程就簡化了：只需將細胞和核酸吸入Neon? 移液器吸頭中，再插入到移液器吸頭架上，即可開始。據(jù)Invitrogen介紹，由于電極的獨特設計，表面積比標準電擊杯要小，因此電穿孔更為溫和，細胞存活率也更高。
目前，Neon已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染了多個細胞系，包括原代星形膠質(zhì)細胞、原代樹突狀細胞、Jurkat、小鼠胚胎干細胞等，在多數(shù)細胞類型中獲得超過75%的轉(zhuǎn)染效率。如果你們實驗室的研究對象是干細胞或原代細胞，這確實是個不錯的選擇，就是價格不那么可愛，在12萬左右。
前面說了這么多，都是轉(zhuǎn)染細胞的，至于活體轉(zhuǎn)染，雖不能說是處女地，也仍是各公司較少涉獵的領域。然而，很多動物模型的研究人員又急切盼望開發(fā)出活體轉(zhuǎn)染的試劑。在N年前，就有人拿Lipofectamine 2000進行活體轉(zhuǎn)染，效果似乎也還行。這么多年過去，Invitrogen終于順應民心開發(fā)出了Invivofectamine?，F(xiàn)在又升級為2.0版。
Invivofectamine 2.0試劑是一種專為siRNA導入而設計的活體RNAi轉(zhuǎn)染試劑，無毒性和**刺激性，能夠讓研究人員在小的動物模型上開展高效的小RNA干擾實驗。通過尾部靜脈注射，Invivofectamine 2.0可將合成的siRNA帶到肝臟，產(chǎn)生高水平的mRNA沉默。實驗證明，Invivofectamine 2.0和附帶的陽性對照Ambion In Vivo siRNA注入后，定向的基因沉默可持續(xù)三周以上。
實驗過程也并不復雜(如下圖)。只需將500 μl Invivofectamine 2.0和500 μl siRNA(1.5 mg/ml)混合后，在50℃孵育30分鐘，再透析至生理條件，即可注射。
大家肯定很關心干擾的持續(xù)時間。研究表明，Invivofectamine 2.0-siRNA復合物的knockdown時間是取決于劑量的，同時也受siRNA分子穩(wěn)定性的影響。研究人員曾注射了 Invivofectamine 2.0試劑及兩條序列相同的siRNA，一條是有著Ambion In Vivo siRNA修飾，另一條則沒有修飾。
至于注射后siRNA的分布，Invitrogen也做過研究。正如預期，大部分siRNA在靜脈注射后進入肝臟細胞，還有一些進入脾臟和腎臟。在腎臟中，冰凍切片顯示標記的siRNA進入腎小球。有趣的是，如果是腹腔注射，那情況則有所變化。標記的 siRNA會進入脾臟和胰腺細胞，以及肝臟，但數(shù)量會低于靜脈注射。
Invivofectamine 2.0目前有兩種規(guī)格：1 mL和5×1 mL，價格分別為14092和51917元。雖說大包裝便宜些，不過有一點需要特別提醒，Invivofectamine 2.0的保質(zhì)期只有6個月，算上訂貨那一個來月的時間，到手后估計只剩4個月，如果沒把握在這段時間用完的話，還是不要買那么多了。
