repligen蛋白的相關(guān)技術(shù)
質(zhì)譜（repligen蛋白）已成為連接蛋白質(zhì)與基因的重要技術(shù)，開啟了大規(guī)模自動(dòng)化的蛋白質(zhì)鑒定之門。用來分析蛋白質(zhì)或多肽的質(zhì)譜有兩個(gè)主要的部分，(1)樣品入機(jī)的離子源，(2)測量被介入離子的分子量的裝置。
首先是基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF)為一脈沖式的離子化技術(shù)。它從固相標(biāo)本中產(chǎn)生離子，并在飛行管中測其分子量。
其次是電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)，是一連續(xù)離子化的方法，從液相中產(chǎn)生離子，聯(lián)合四極質(zhì)譜或在飛行時(shí)間檢測器中測其分子量。
在MALDI-TOF中，重要的進(jìn)步是離子反射器(ion reflectron)和延遲提取(delayed ion extraction)，可達(dá)相當(dāng)**的分子量。在ESI-MS中，納米級電霧源(nano-electrospray source)的出現(xiàn)使得微升級的樣品在30～40 min內(nèi)分析成為可能。
將反相液相色譜（repligen蛋白）和串聯(lián)質(zhì)譜(tandem MS)聯(lián)用，可在數(shù)十個(gè)picomole的水平檢測;若利用毛細(xì)管色譜與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用，則可在低picomole到高femtomole水平檢測;當(dāng)利用毛細(xì)管電泳與串聯(lián)質(zhì)譜連用時(shí)，可在小于femtomole的水平檢測。甚至可在attomole水平進(jìn)行。目前多為酶解、液相色譜分離、串聯(lián)質(zhì)譜及計(jì)算機(jī)算法的聯(lián)合應(yīng)用鑒定蛋白質(zhì)。下面以肽質(zhì)指紋術(shù)和肽片段的測序來說明怎樣通過質(zhì)譜來鑒定蛋白質(zhì)。
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