各種ALEXA FLUOR染料的強(qiáng)大應(yīng)用剖析

本文的內(nèi)容圍繞Alexa Fluor染料的優(yōu)點(diǎn)、Alexa Fluor染料可替代的熒光染料、各種Alexa Fluor 染料的光譜特性，為您展示Alexa Fluor 這一熒光標(biāo)記試劑明星產(chǎn)品的強(qiáng)大功能和廣泛應(yīng)用潛力所在。

Alexa Fluor 是熒光標(biāo)記試劑的一大突破，涵蓋了從近紫外、可見光，到近紅外光譜的一系列熒光染料，其代表了熒光標(biāo)記試劑發(fā)展的一個(gè)重大突破，并產(chǎn)生了目前為止我們測(cè)試過(guò)的，好亮的復(fù)合物。作為新一代染料，Alexa Fluor 染料系列及其復(fù)合物，能為您解決熒光染色常見問(wèn)題。

Alexa Fluor 的優(yōu)點(diǎn)如下：

? 亮度 — Alexa Fluor 偶聯(lián)物相比其他染料熒光更強(qiáng)。

? 光穩(wěn)定性 — Alexa Fluor 偶聯(lián)物相比其他染料光穩(wěn)定性更強(qiáng)，提供更長(zhǎng)的圖像捕獲時(shí)間。

? 儀器兼容性 — Alexa Fluor 偶聯(lián)物的吸收光譜與普通激發(fā)光源的主要輸出波長(zhǎng)相匹配。

? 多種顏色 — Alexa Fluor 偶聯(lián)物有藍(lán)色到紅色的多種直接熒光.

? pH 值不敏感 — Alexa Fluor 染料在一個(gè)廣泛的pH 范圍內(nèi)保持強(qiáng)熒光.

? 水溶性 — Alexa Fluor 反應(yīng)性染料有良好的水溶性, 無(wú)需有機(jī)試劑即可結(jié)合蛋白, 且儲(chǔ)存不易產(chǎn)生沉淀.

Alexa Fluor 染料的光譜特性:

?Alexa Fluor 350— 亮藍(lán)和紫外光激發(fā)

Alexa Fluor 350 的藍(lán)色熒光比AMCA 亮50%，而且大發(fā)射波長(zhǎng)稍短(為442nm ，AMCA 為448nm)，因此更容易與現(xiàn)有的綠色熒光基團(tuán)區(qū)分。

? Alexa Fluor 405 —近乎**的匹配藍(lán)色二極管激光器

Alexa Fluor 405 的激發(fā)/發(fā)射**長(zhǎng)為402/421 nm，與近來(lái)使用的熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀405nm譜線的藍(lán)色二極管激光器近乎**的匹配。Alexa Fluor 405 琥珀酰酯是Cascade Blue 的氨基反應(yīng)性衍生物，后者是乙酰疊氮化物。Alexa Fluor 405琥珀酰酯純度更高且有一個(gè)4-**羧酸的間隔，使得熒光基團(tuán)與其偶聯(lián)的生物分子之間的反應(yīng)性小化。

?Alexa Fluor 430—高斯托克斯頻移的430 nm吸收少數(shù) 400nm ~ 450nm 吸收的染料在水溶液中可測(cè)熒光偏離500nm。Alexa Fluor 430 彌補(bǔ)了這一缺陷，430nm激發(fā)時(shí)發(fā)射在540nm附近。

?Alexa Fluor 488—好的綠色熒光基團(tuán)

Alexa Fluor 488 偶聯(lián)蛋白優(yōu)于其他熒光素，實(shí)驗(yàn)證明比包括Cy2 的其他綠色熒光基團(tuán)都好。不僅亮度更高，而且光穩(wěn)定性更好。在pH4～10 保持穩(wěn)定是另一優(yōu)越之處。

? Alexa Fluor 532 —適于532 nm 激發(fā)光源的染料

激發(fā)發(fā)射波長(zhǎng)位于綠色熒光Alexa Fluor 488 和橙色熒光的Alexa Fluor 546 之間，適用于雙頻Nd:YAG激光器在內(nèi)的532 nm 激發(fā)光源。

?Alexa Fluor 546—Cy3 和四甲基羅丹明的替代物

Alexa Fluor 546 標(biāo)記的偶聯(lián)物良好應(yīng)用于橙色范圍光譜，比四甲基羅丹明(TRITC 、TAMRA) 及Cy3 熒光更強(qiáng)，容易被汞弧燈激發(fā)，發(fā)射波長(zhǎng)546 nm。

?Alexa Fluor 555—優(yōu)于Cy3 的替代物

Alexa Fluor 555 與Cy3 偶聯(lián)物的光譜相匹配，因此適用于Cy3 的濾光器。Alexa Fluor 555 的總熒光更強(qiáng)，且光穩(wěn)定性更好，為研究者提供了更長(zhǎng)的圖像捕獲時(shí)間。

?Alexa Fluor 568 —適于568 nm 激發(fā)光源

Alexa Fluor 568 的橙紅色熒光適用于激光共聚焦顯微鏡的Ar–Kr 混合氣體激光器，其發(fā)射的譜線為568nm。與具有相似大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)的Lissamine Rhodamine B 和Rhodamine Red-X 相比， Alexa Fluor 568的偶聯(lián)物亮度更高。

? Alexa Fluor 594 —優(yōu)于Texas Red 的替代品

Alexa Fluor 594 偶聯(lián)物發(fā)出紅色光，可與綠色熒光探針一同用于多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。比Texas Red 偶聯(lián)物有更高的亮度。

? Alexa Fluor 610—Alexa Fluor 好的紅色染料

Alexa Fluor 610 亮度高、光穩(wěn)定， 可用檢測(cè) Texas Red 和Alexa Fluor 594 的光學(xué)元件檢測(cè)。前身是FRET-based Alexa Fluor–phycobiliprotein 的受體染料。新的Alexa Fluor 610 激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為612/628nm，容易與綠色熒光基團(tuán)相區(qū)分，適用于多色標(biāo)記。Alexa Fluor 610 仍為人眼可見，優(yōu)于Alexa Fluor 633和其他更長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光團(tuán)。

? Alexa Fluor 633 —光穩(wěn)定性更強(qiáng)

遠(yuǎn)紅光染料近來(lái)大受歡迎，是因?yàn)樗鼈兊墓庾V范圍在大多數(shù)樣品的自發(fā)熒光之外。He–Ne 激光器 633 nm 和紅色二極管激光器635 nm 譜線的廣泛應(yīng)用加速了兼容染料的開發(fā)。Alexa Fluor 633 偶聯(lián)物具有亮度和光穩(wěn)定性，吸收峰在632 nm，發(fā)射峰在650 nm。

?Alexa Fluor 635 —He–Ne 激光器633 nm 線的佳染料

新的 Alexa Fluor 635 染料，其偶聯(lián)物比Alexa Fluor 633 亮度更高，因?yàn)樗奈展庾V不會(huì)象Alexa Fluor 633、Cy5 和tetramethylrhodamine 那樣分成兩個(gè)峰。Alexa Fluor 635 同樣適用于He–Ne 激光器的633 nm譜線和紅色二極管激光器的635 nm 譜線，吸收峰在633 nm，發(fā)射峰在647 nm。

? Alexa Fluor 647 —優(yōu)于Cy5 的替代品

Alexa Fluor 647 與Cy5 偶聯(lián)物的光譜及濾光器相匹配。Alexa Fluor 647 二抗偶聯(lián)物的總熒光亮度高于其他公司的Cy5 偶聯(lián)物。在與大多數(shù)的蛋白質(zhì)、寡核苷酸和核酸結(jié)合時(shí)，Alexa Fluor 647 相比Cy5 熒光吸收光譜波動(dòng)很小，因此在同等程度的替換時(shí)發(fā)出的熒光更強(qiáng)。

? Alexa Fluor 680 —Cy5.5 的替代物

Alexa Fluor 680 的激發(fā)峰在679 nm，大發(fā)射為702 nm，與Cy5.5 類似。Alexa Fluor 680 能夠很好的與其他紅色熒光團(tuán)區(qū)分，如 Texas Red, R-phycoerythrin, Alexa Fluor 594 和Alexa Fluor 647，是理想的三色與四色標(biāo)記用染料。

?Alexa Fluor 700 —遠(yuǎn)紅光二極管激光器的適染料

Alexa Fluor 700 大吸收在696 nm，能夠被675–700 nm 范圍的氙弧燈、遠(yuǎn)紅外二極管激光器或dye-pumped lasers 激發(fā)。發(fā)射光在紅外區(qū)，峰值為719 nm。

?Alexa Fluor 750—Alexa Fluor 長(zhǎng)波長(zhǎng)的產(chǎn)品

Alexa Fluor 750 是目前的Alexa Fluor 系列產(chǎn)品中波長(zhǎng)長(zhǎng)的產(chǎn)品，與Cy7 光譜相似。其發(fā)射的**長(zhǎng)為779 nm，能夠和Alexa Fluor 647 及allophycocyanin (APC)區(qū)分，適合多色分析。Alexa Fluor 700偶聯(lián)物 752 nm 的大激發(fā)光使其適用于720–750 nm 范圍的氙弧燈或dye-pumped lasers。

成功的實(shí)驗(yàn)都是相似的，不成功的實(shí)驗(yàn)卻各有各的問(wèn)題所在。每一次的**標(biāo)記實(shí)驗(yàn)都會(huì)或多或少遇到些耽誤進(jìn)程的問(wèn)題，希望本篇介紹的Alexa Fluor能夠?qū)崒?shí)在在幫您減輕實(shí)驗(yàn)中的煩惱。