小分子RNA研究熱度不減，從早先的sirna到目前大熱的miRNA，一波接一波。對于小分子RNA的轉染，大部分研究人員使用的是陽離子或兩性分子脂類轉染試劑。
轉染過程大多很簡單：混合核酸和轉染試劑，等幾分鐘，加到細胞中，幾天后分析。但是你得做好優(yōu)化的準備。我們的目標是用恰恰好的試劑導入恰恰好的siRNA，在沉默目的基因的同時又不會產生脫靶效應。但是何謂之恰恰好，這就很難把握。根據細胞類型、匯合度、小分子RNA濃度、平板類型的不同，轉染效率可能差異很大，所以你必須得優(yōu)化。
市場上主流的小RNA轉染試劑有Life Technologies的Lipofectamine? RNAiMAX、Qiagen的HiPerFect、Thermo Scientific的DharmaFECT、羅氏的X-tremeGENE siRNA轉染試劑及Bio-Rad的siLentFect? 等。此次將它們集合起來，并奉上參數和價格，方便大家比較。
1、產品名：Lipofectamine? RNAiMAX
性價比高!
廠家：Life Technologies(invitrogen)
優(yōu)點：較低濃度的RNA分子也能帶來高的轉染效率，在10倍濃度范圍內輕松優(yōu)化
簡介：Lipofectamine? RNAiMAX轉染試劑是一款RNAi特異的陽離子脂質體試劑，可以高效地將小分子RNA導入多種細胞類型。盡管Lipofectamine? RNAiMAX的說明書建議以10nM siRNA 作為優(yōu)化干擾效果的起始濃度，但是僅用1nM siRNA 也可以獲得較好的靶基因干擾效果。
Lipofectamine? RNAiMAX 轉染試劑可以在10倍的濃度范圍內獲得大的干擾效果以及**的細胞存活率，這個特點使得Lipofectamine? RNAMAX的轉染條件極易優(yōu)化，以便在實驗中使用低的siRNA濃度，從而降低細胞毒性。不過，這款試劑只能用于小RNA的轉染，不能用于共轉染。如果需要共轉染，只能借助經典的Lipo 2000。
操作流程(順式轉染)：用Opti-MEM分別稀釋RNA分子和Lipofectamine RNAiMAX，將兩者混合，室溫下孵育10-20分鐘。加入培養(yǎng)細胞中，在37°C孵育24-48小時。
細胞特異的步驟：可在網站上搜索到，地址為：www.invitrogen.com/RNAi。按照細胞系名稱排列，找起來還算方便，但DNA和RNA的轉染都混在一起，還要仔細分分，有時會眼花。
價格：4190元/0.75 ml，7200元/1.5 ml(24孔板的每孔建議用量為1 μl)雖然目錄價看上去貴一些，但實際用量較省，因此綜合來看性價比較高。
2、產品名：HiPerFect Transfection Reagent 使用方便!
廠家：QIAGEN
優(yōu)點：細胞存活率高，快速反式轉染，適合高通量的RNAi篩選，細胞特異的步驟詳細
簡介：HiPerFect Transfection Reagent是一種陽離子和中性脂類的獨特混合物，能實現高效的siRNA吸收和細胞內siRNA的高效釋放，即便使用低濃度的siRNA，也能產生高的基因knockdown。HiPerFect Transfection Reagent非常適合高通量的反式轉染，也適合miRNA研究。
操作流程(傳統(tǒng)步驟)：用不含血清的培養(yǎng)基稀釋siRNA，加入HiPerFect轉染試劑，在室溫下孵育5-10分鐘。逐滴加入細胞，在正常條件下培養(yǎng)，監(jiān)控基因沉默。
細胞特異的步驟：使用手冊中詳細列出了幾大類細胞的實驗步驟，包括貼壁細胞、懸浮細胞和巨噬細胞，以及原代細胞。例如Jurkat、HUVEC、上皮細胞、平滑肌細胞等常用細胞的轉染步驟，無需在網上費力搜索，都可在使用手冊中輕松找到。另外，還有一些原代細胞培養(yǎng)和轉染的建議。如果你的細胞未包括在實驗手冊上，那么可在轉染細胞數據庫(www.qiagen.com/TransfectionCellDatabase)中查找，也相當方便。
價格：530元/0.1 ml，1670元/0.5 ml，2960元/1 ml，10450元/4×1 ml(24孔板的每孔建議用量3 μl)
3、產品名：X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent 適合共轉染!
廠家：Roche
優(yōu)點：高效轉染siRNA，siRNA或siRNA-質粒的共轉染，靈活性高
簡介：X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent是一個基于脂質體的、并經過優(yōu)化的轉染試劑。雖說名字上寫著siRNA，但它也能用于siRNA和表達質粒的共轉染。它能和小干擾 RNA(siRNA)或siRNA/質粒DNA混合物形成復合物，并高效地轉入動物細胞，引發(fā)相應的基因沉默。相對較小的細胞內毒性，確保觀測到的細胞效應僅同轉染或共轉染的siRNA相關。有無血清均可進行轉染，轉染后無需進行換液操作。
操作流程：用無血清Opti-MEM分別稀釋X-tremeGENE siRNA 轉染試劑和siRNA，混合并在室溫下孵育15-20分鐘。加入細胞，監(jiān)控干擾效果。
細胞特異的步驟：在羅氏的轉染數據庫中，可以根據細胞名稱搜索相關的轉染步驟，使用下拉菜單，比較方便。但網站上沒有提供具體的步驟，而是鏈接到相關文獻，需要自己再去找。
價格：2411元/1 ml，10256元/5×1 ml(24孔板的每孔建議用量為2.5 μl)
4、產品名：DharmaFECT 1、2、3、4 Transfection Reagent 選擇面廣!
廠家：Thermo Fisher Scientific
優(yōu)點：有4種試劑可供選擇，選擇面廣
簡介：DharmaFECT 的陣營為強大，以4敵1，自然占盡上風。眾所周知，單一的轉染試劑不可能滿足上百種細胞系對siRNA的轉染要求;因此，Dharmacon通過對上百種細胞系/株逐個篩選和優(yōu)化，開發(fā)出了適合特定細胞系/株的轉染試劑，滿足更大范圍的細胞系/株對siRNA的高效轉染需求。不過，一下子來了四種，選擇起來也有點麻煩。幸好，Dharmacon根據客戶的使用反饋情況收錄了這4種轉染試劑對絕大部分細胞的成功轉染情況，整理成表，供客戶參考選擇。
操作流程(共轉染)：用無血清培養(yǎng)基稀釋siRNA和DharmaFECT轉染試劑，室溫孵育5分鐘，混合后室溫孵育20分鐘，加入無***的完全培養(yǎng)基。換成轉染培養(yǎng)基，在37°C孵育24-48小時或更長。
價格：1200元/0.2 ml，3300元/0.75 ml，5400元/1.5 ml(24孔板的每孔建議用量為0.25-2.5 μl)
5、產品名：siLentFect? reagent 便宜!
廠家：Bio-Rad 索取資料
簡介：siLentFect專門為RNA干擾實驗設計，可將小分子干擾RNA高效轉入培養(yǎng)的哺乳動物細胞。 siLentFect**的siRNA 吸附能力和高效的轉化效率可以在使用低轉染試劑劑量和低siRNA濃度的條件下實現目的基因的沉默。siLentFect 脂質試劑能夠有效地將siRNA 轉到很多細胞系中，包括難于轉染的初代細胞和非標準細胞系如 MCF–7 等。siLentFect 對siRNA高的吸附能力確保每次實驗使用較少的脂質試劑和較少的siRNA 用量，降低了脫靶效應的可能性，同時也減少了花費。它也可以用于siRNA和質粒DNA的共轉染。
操作流程：用無血清培養(yǎng)基分別稀釋siLentFect轉染試劑和siRNA，混合并在室溫下孵育20分鐘。加入細胞，監(jiān)控干擾效果。
細胞特異的步驟：暫無。說明書上只列出了一般的操作步驟，建議以此為起點自行優(yōu)化。
價格：2275元/0.5 ml，3733元/1.0 ml(24孔板的每孔建議用量為0.75 μl)
轉染試劑的比較本身就是一件很難的事情，因為甲之砒霜，乙之蜜糖，很難評出一個綜合**。大家可以根據有無細胞特異的步驟、價格、共轉染等要求來綜合選擇一個。希望本文對您的選擇有小小幫助，也歡迎您將使用情況反饋給我們。
