大量的證據(jù)表明，miRNA表達(dá)的失調(diào)是一些**過程(包括許多癌癥)的起因或指示劑。研究還發(fā)現(xiàn)血清和血漿中可以檢測(cè)到循環(huán)miRNA，且它們的表達(dá)因**而異，這一發(fā)現(xiàn)說明循環(huán)miRNA的表達(dá)特征可作為**診斷和預(yù)防的生物標(biāo)志物，具有巨大潛力。
miRNA研究的成功依賴于高性能工具和技術(shù)的使用。Qiagen是一個(gè)一站式供應(yīng)商，滿足您在miRNA純化、定量和功能鑒定上的所有需求。歡迎訪問QIAGEN的GeneGlobe? 網(wǎng)頁(www.qiagen.com/GeneGlobe)，訂購miRNA特異的產(chǎn)品，并發(fā)現(xiàn)大量寶貴的基因信息、通路信息和生物信息學(xué)工具。
QIAgen提供了以下方案：
一、miRNA純化
利用miRNeasy Kits和PAXGENE? Kits純化高質(zhì)量總RNA，包括miRNA。
二、miRNA表達(dá)譜分析
利用miScript? miRNA PCR Arrays快速分析整個(gè)miRNA組(miRNome)或通路聚焦的miRNA分析板
三、miRNA生物發(fā)生和調(diào)控研究
利用miScript PCR System同時(shí)定量成熟的miRNA(聯(lián)合miScript Primer Assays)、前體miRNA(聯(lián)合miScript Precursor Assays)和mRNA目標(biāo)(聯(lián)合QuantiTect? Primer Assays)。
四、miRNA功能分析
利用miScript miRNA Mimics、Inhibitors和Target Protectors確定miRNA的功能。
揭開miRNA生物發(fā)生的機(jī)制
對(duì)于一些研究前體miRNA與成熟miRNA的關(guān)系的實(shí)驗(yàn)，必須能靈活檢測(cè)同一cDNA樣品中兩種類型的miRNA。利用miScript II RT Kit 以miScript HiFlex Buffer 制備的cDNA就具有這種靈活性。在實(shí)時(shí)定量PCR中，成熟miRNA可利用miScript Primer Assays檢測(cè)，而前體miRNA可利用miScript Precursor Assays檢測(cè)。單獨(dú)的miScript Primer Assays 和miScript Precursor Assays 可在GeneGlobe網(wǎng)頁上查找。對(duì)于不同miRNA來說，成熟miRNA與前體miRNA的相對(duì)水平存在差異。此外，在不同條件下或不同組織中，成熟miRNA可從不同的前體miRNA中表達(dá)。
miRNA的功能分析
在功能研究中查明miRNA的作用
miRNA功能研究讓您能夠鑒定出特定miRNA的目標(biāo)和作用，分析個(gè)別miRNA失調(diào)的生物學(xué)影響，并驗(yàn)證某個(gè)基因是特定miRNA的目標(biāo)。功能研究可利用miScript miRNA Mimics、miScript miRNA Inhibitors和miScript Target Protectors來開展。目前可訂購各種規(guī)格和形式，包括管、96孔板和384孔板。
發(fā)現(xiàn)miRNA功能的策略：
1.利用miScript miRNA Mimics模擬內(nèi)源miRNA的調(diào)控
2. 利用miScript miRNA Inhibitors抑制內(nèi)源miRNA
3. 利用miScript Target Protectors保護(hù)單個(gè)miRNA目標(biāo)基因
利用miScript miRNA Mimics來復(fù)制內(nèi)源miRNA的功能
miScript miRNA Mimics是合成的雙鏈RNA，它們?cè)谵D(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞后模擬了天然存在的miRNA。miScript miRNA Mimics導(dǎo)致基因表達(dá)下降，與內(nèi)源miRNA所觀察到的相似。在轉(zhuǎn)染后72小時(shí)，基因表達(dá)被有效抑制。
利用miScript miRNA Inhibitors來阻遏內(nèi)源miRNA
miScript miRNA Inhibitors是合成的、化學(xué)修飾的單鏈RNA，它們?cè)谵D(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞后特異地抑制了miRNA的功能。miScript miRNA Inhibitors經(jīng)過設(shè)計(jì)和修飾，能確保內(nèi)源miRNA的功能被高效抑制。時(shí)間進(jìn)程實(shí)驗(yàn)表明，miScript miRNA Inhibitors 在轉(zhuǎn)染后至少96小時(shí)內(nèi)有效。
利用miScript Target Protectors來選擇性保護(hù)miRNA目標(biāo)
miScript Target Protectors 是經(jīng)過修飾的單鏈RNA，它們能特異干擾miRNA與單個(gè)目標(biāo)之間的相互作用，同時(shí)讓同一miRNA對(duì)其他目標(biāo)的調(diào)控不受影響。在轉(zhuǎn)染之后，miScript Target Protectors與其特異的miRNA結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，阻止miRNA接近此位點(diǎn)，并防止特定miRNA的基因下調(diào)作用。miScript Target Protectors 轉(zhuǎn)染之后是表型或基因表達(dá)分析。目標(biāo)基因表達(dá)的增加，信號(hào)模式的改變，或表型改變，都能夠提供證據(jù)，說明研究中的miRNA和目標(biāo)與感興趣的通路或表型相關(guān)。
